T細胞ELISPOT測定

T細胞ELISPOT測定的預(yù)期用途

ELISPOT檢測是需要監(jiān)測的靈敏的檢測方法之一 離體 單細胞水平的細胞免疫反應(yīng)。該測定可以準確檢測T細胞響應(yīng)抗原釋放的分泌蛋白，例如細胞因子。測試中使用的細胞懸浮液可以來自血液（PBMC），淋巴，脾臟，骨髓或CNS組織。

經(jīng)典的 T 細胞監(jiān)測試驗（例如混合淋巴細胞反應(yīng) [MLR] 和細胞毒性 T 淋巴細胞 [CTL] 試驗）測量 CD4 +或 CD8 +  T 細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。 MLR 和 CTL 檢測都有其缺點，包括使用放射性、低通量篩選、低溫保存標本的靈敏度降低和技術(shù)負擔。也可以使用 RT-PCR 分析來測量 T 細胞反應(yīng)。然而，該測定檢測的是 mRNA 而不是分泌的蛋白質(zhì)。

ELISPOT 檢測沒有這些缺點，已證明比 ELISA 或細胞內(nèi)細胞因子染色更靈敏。1-3 高靈敏度是由于板結(jié)合抗體在細胞釋放的分泌蛋白在細胞培養(yǎng)基中稀釋、與細胞表面受體相互作用或被蛋白酶降解之前直接捕獲細胞釋放的分泌蛋白。這一特性允許檢測極低頻率的細胞因子分泌細胞 (1/100,000)，并且還提供了高通量篩選的可能性。

應(yīng)用

• ELISPOT 檢測已被證明是一種靈敏的系統(tǒng)，可用于監(jiān)測人類個體或動物的疾病進展。多項研究表明，身體不同部位產(chǎn)生細胞因子的細胞頻率的變化充分反映了免疫功能的變化。4個

• ELISPOT 檢測可能有助于了解新病毒引起疾病的情況下疾病的發(fā)展，以及早期疫苗開發(fā)研究，

• ELISPOT 測定可用于分析 T 細胞反應(yīng)以預(yù)測同種異體移植排斥反應(yīng)。7

• ELISPOT測定可用于確定接種疫苗的非人靈長類動物PBMC中抗原特異性T細胞反應(yīng)的頻率8,9 和免疫大鼠的脾臟細胞10 和老鼠11.

• ELISPOT測定可能有助于更好地了解病原體如何逃避保護性免疫。12

• ELISPOT測定已用于旨在誘導(dǎo)腫瘤特異性T細胞的疫苗接種試驗過程中。13,14

T細胞ELISPOT程序的簡要說明

將細胞在涂有高親和力單克隆抗體的ELISPOT板的孔中孵育特定時間，孵育期間產(chǎn)生的細胞因子與該抗體結(jié)合。隨后，細胞被洗掉。用生物素化的抗細胞因子檢測抗體和酶標記的鏈霉親和素的組合來檢測包被抗體捕獲細胞因子的區(qū)域。測定的最后一步是添加底物，產(chǎn)生一個彩色區(qū)域（“斑點"），揭示細胞因子分泌的部位。
T細胞ELISPOT程序的不同步驟在 T細胞ELISPOT檢測流程圖.

這是人類PBMC中T細胞產(chǎn)生的IFN-γ和IL-2特異性斑點的一個例子。
該人肌內(nèi)注射了 病毒 mRNA 疫苗（加強疫苗接種）。用SARS-CoV-2肽庫刺激疫苗接種前后的PBMC，并在ELISPOT平板上孵育24小時（2x105 細胞/孔）

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