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細胞庫實踐綜合指南

更新時間:2024-04-09      點擊次數(shù):984

細胞培養(yǎng)的有效管理對于保持其在研究和治療應用中的完整性至關重要。細胞系的連續(xù)或長期培養(yǎng)會導致各種并發(fā)癥,例如:

  • 微生物污染:

    開放培養(yǎng)容易受到各種微生物感染,這些微生物會改變細胞行為和生存能力。
  • 特征變化:

    關鍵的細胞特征,如抗原表達或抗體產生,可能會隨著時間的推移而丟失。
  • 遺傳變異:

    基因組不穩(wěn)定性可能發(fā)生在以核型不穩(wěn)定而聞名的細胞系中,從而導致不可靠的實驗結果。
  • 壽命限制:

    某些類型的細胞在進入衰老和停止增殖之前分裂次數(shù)有限。
  • 交叉污染風險:

    長期培養(yǎng)增加了一個細胞系污染另一個細胞系的風險,從而導致錯誤的數(shù)據(jù)。
  • 資源密集度:

    長期培養(yǎng)需要更多的消耗品和勞動力,大大增加了成本。

細胞庫的戰(zhàn)略方法

細胞庫系統(tǒng)是減輕上述風險的戰(zhàn)略方法。推薦的系統(tǒng)是主小區(qū)銀行系統(tǒng),包括以下步驟:

  1. 初始隔離:

    新獲得的細胞培養(yǎng)物應在嚴格的檢疫條件下隔離和處理,以防止實驗室污染。
  2. Token Stock Establishment:

    初始培養(yǎng)擴增后,應冷凍保存少量安瓿瓶(3-5瓶)作為應急備用的象征性儲備。
  3. 主細胞庫形成:

    從代幣儲備安瓿瓶擴大培養(yǎng)物,以建立由大量安瓿瓶組成的主細胞庫(10-20個或更多,根據(jù)計劃使用情況而定)。
  4. 嚴格的質量控制:

    主細胞庫的一個子集經歷了全面的質量控制測試,其中包括評估細胞活力,確認不存在微生物污染物,并可能進行病毒和真實性測試。
  5. 工作細胞庫的開發(fā):

    然后使用主細胞庫的一部分創(chuàng)建工作細胞庫,這是積極研究和應用的主要來源。

詳細的質量控制協(xié)議

質量控制是維護細胞庫的關鍵部分。它包括:

  • 生存力和計數(shù)測試:

    確保細胞存活且數(shù)量充足。
  • 微生物篩選:

    定期檢測細菌、真菌和支原體以防止細胞培養(yǎng)受損。
  • 認證程序:

    通過DNA分析等方法確認細胞系的身份。

存儲和使用建議

正確的儲存條件如下:

  • 專用存儲設施:

    利用專門為儲存細胞庫設計的設施,如液氮罐或電冰柜,以防止交叉污染并確保長期生存能力。

一致性和質量保證:

  • 一致的細胞材料:

    細胞庫系統(tǒng)確保實驗中使用的所有材料都來自一致的來源。
  • 受控通道數(shù):

    通過使用在可控傳代次數(shù)范圍內的細胞,實驗可變性被最小化。
  • 適時文化實踐:

    僅在必要時培養(yǎng)細胞有助于保持細胞系的原始特性,并降低與保持連續(xù)培養(yǎng)相關的成本。


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