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大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒介紹

更新時間:2023-07-15      點擊次數(shù):993

途:用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)測定。
工作原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)水平。向預(yù)先包被了大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成


需要而未提供的試劑和器材

137℃恒溫箱。
2.標準規(guī)格酶標儀。
3.精密移液器及一次性吸頭
4.蒸餾水,
5.一次性試管
6.吸水紙

注意事項
1.從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差
3.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
4.為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
5.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
6.底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序
1.標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)


2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗PAI抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗PAI抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
9.根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

操作程序總結(jié):

1.準備試劑,樣品和標準品

2.加入準備好的樣品和標準品,生物素標記的二抗和酶標試劑,37℃反應(yīng)60分鐘

3.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘

4.加入終止液

5.10分鐘內(nèi)讀OD值

6.計算


試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%15%

檢測范圍
檢測范圍:30ng/L - 900ng/L

保存條件及有效期:
保存:2-8℃。
有效期:6個月(2-8)。


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